Defesa de Tese de Doutorado — Fernando Riback Silva

Fernando Riback Silva

Análise do papel da Serina/Treonina proteína quinase humana NEK6 na regulação da homeostase mitocondrial

Local: Auditório da FCF | transmissão ao vivo

Presidente
Prof. Dr. Jörg Kobarg

Membros titulares
Profª Drª Nadja Cristhina de Souza Pinto — IQ / USP
Profª Drª Deborah Schechtman— IQ / USP
Profª Drª Catarina Raposo Dias Carneiro — FCF / Unicamp
Prof. Dr. Daniel Fabio Kawano — FCF / Unicamp

Membros suplentes
Prof. Dr. Claudio Chrysostomo Werneck — IB / Unicamp
Drª Ângela Saito — LNBio / CNPEM
Dr. Tanes Imamura de Lima — Boston School of Medicine

Resumo

A família de NEK quinases, ou “NIMA related kinases”, tem 11 membros em humanos, que são conservados na sequência de aminoácidos do seu domínio quinase, mas divergem nos seus domínios regulatórios. Funcionalmente, eles podem ser associadas a diversos aspectos da regulação do ciclo celular, incluindo mitose, função do cílio primário, disjunção do centrossoma na fase G2, e diferentes pontos de checagem associadas à resposta de danos de DNA. Entretanto, novas funções emergiram em anos recentes, incluindo papéis regulatórios das NEKs 1, 4, 5 e 10 no metabolismo e homeostase morfológica das mitocôndrias. Aqui caracterizamos as células knockout para NEK6 Du-145, recém geradas, usando tecnologia Crispr Cas9, no contexto da respiração mitocondrial e da morfologia mitocondrial. Nos achados vimos que as células Du-145 knockout para NEK6 tinham uma respiração diminuída em comparação com células Du-145 selvagens. Além disso, as células knockout NEK6 demonstraram um fenótipo de fragmentação mitocondrial em microscopia eletrônica, e um número de cristas reduzido. Em seguida, uma análise molecular por Western blotting revelou que o nível de marcadores da massa mitocondrial (Tom20, TFAM) diminuiu nas células knockout para NEK6. Ainda observamos que os reguladores da fusão/fissão mitocondrial foram aumentadas (Opa1) e diminuídas (Drp1), respectivamente, enquanto o marcador de autofagia LC3A/B foi diminuído em células knockout para NEK6. No conjunto, nossos novos dados sugerem um papel regulatório importante da NEK6 para a homeostase mitocondrial. Por fim nós discutimos a tendência geral dos membros da família de NEKs nesse novo contexto e comparamos as similaridades e diferenças dos knockout/knockdowns de NEK 1, 4, 5 e 10 com os dados novos sobre a NEK6 relatados aqui. Ainda discutimos possíveis implicações das regulações pelas NEKs nas mitocôndrias, no contexto de doenças humanas.